激光共聚焦检测LC3、P62和NLRP3、ASC及Caspase-1的蛋白表达

发布时间:2020-06-29 浏览次数: TAG: 激光共聚焦 LC3 P62 NLRP3 ASC Caspase-1 蛋白表达 微量离心管 离心管 血清移液管

关键词:激光共聚焦 LC3 P62 NLRP3 ASC Caspase-1 蛋白表达 微量离心管  离心管  血清移液管

 

(1)固定:A.细胞:将所需检测细胞中于激光共聚焦专用培养皿中或放有玻片的24孔胞培养板内,并给予相应处理因素,控制细胞密度在104-105,不可太密集。在细胞处理因素终点时,取密度合适的细胞,弃去培养基,用PBS轻轻冲洗三次,吸干PBS后加入10%福尔马林室温固定30min。组织切片:将冰冻切片放入60℃恒温箱烤片30min以防掉片,10%福尔马林固定10min。

(2)破膜:弃去福尔马林,滴加0.2%Trion-100,37℃,破膜5min,PBS漂洗3次(组织切片5min×3次)。

(3)抗原修复:加入PH=6的柠檬酸缓冲液,微波炉蒸煮5min,冷却至室温,PBS漂洗3次(组织切片5min×3次)。

(4)封闭:用滤纸吸干细胞或组织周围PBS,将山羊血清滴于细胞或组织上,37℃孵箱封闭1h。

(5)一抗孵育:弃去封闭液,滴加按比例稀释混合的一抗(一标和二标同时加入),如NLRP3、ASC和Caspase-1,稀释比例为1:50,LC3(1:100),P62(1:200),放于4℃冰箱过夜。

(6)二抗孵育:弃去一抗,PBS漂洗3次(组织切片5min×3次),滴加按比例混合稀释的对应荧光二抗(一标和二标同时加入),稀释比例为1:50,暗盒中37℃孵育2h。

(7)染核:弃去二抗,PBS漂洗3次(组织切片5min×3次),滴加DAPI染液,暗盒中37℃孵育5min。

(8)封片:弃去DAPI染液,PBS漂洗3次(组织切片5min×3次),滤纸吸干细胞或组织周围液体,晾干后直接滴加防猝灭剂封片。可存放于4℃,避光保存,尽快进行激光共聚焦显微镜采图。

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

接种环

接种针

冻存管

冻存盒

程序降温盒

离心管

微量离心管

血清移液管

巴氏吸管

移液吸头

8连管

96孔板

封板膜

封板刮刀

 

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

细胞培养板平底TC处理无菌

耐思细胞培养皿35mm

耐思细胞培养皿60mm

耐思细胞培养皿100mm

耐思细胞培养皿1150mm

硕华细胞培养皿35mm

硕华细胞培养皿60mm

硕华细胞培养皿100mm

一次性培养皿

一次性细胞培养皿

无菌TC细胞培养皿

耐思玻底培养皿

硕华玻底培养皿

激光共聚焦培养皿

耐思玻底培养皿15mm

耐思玻底培养皿20mm

独立灭菌玻底培养皿

灭菌TC玻底培养皿

硕华玻底培养皿15mm

硕华玻底培养皿20mm