关键词:肾癌组织 缺氧 侵袭 蛋白 HIF2α COX2 E-cadherin  冻存管 冻存管 程序降温盒

 

1.3实验方法

1.3.1免疫组织化学染色

蜡块组织切片至5um薄片→脱蜡后梯度乙醇脱水→滴加3%双氧水常温下孵育10分钟行内源性过氧化物酶活性阻断→PBS清洗3分钟×3次→0.01M枸橼酸盐缓冲液(pH6.0)浸泡切片,抗原修复后煮沸加热,沸腾后自然冷却,重复抗原修复步骤3次,每次间隔10min→常温下冷切后PBS冲洗3min×3次,→血清封闭液封闭后,37℃下放置10min,倾除剩余的液体→各取50μlCOX2、HIF2α、E-cadherin以及Snail第一抗体滴加至切片,注意要完全覆盖组织(原液用抗体稀释液按1:50稀释),置于4℃条件下12小时→PBS冲洗3min×3次,→滴加第二抗体,在37℃条件下放置15min,PBS冲洗3min×3次,→加辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素→37℃放置15min,PBS洗涤3min×3次→滴加DAB混合液,镜下观察并且根据颜色深浅调节染色反应时间,蒸馏水清洗终止

反应→苏木素复染,依次脱水、风干、二甲苯透明,最后用中性树胶封片→在光镜下观察。

1.3.2染色评价标准

阳性结果的判断原则:细胞核或者/和细胞膜出现棕黄色着色颗粒,在每一切片中随机选取10个视野,按照(视野中细胞总数/阳性细胞数)×100%以及染色深浅来判断表达结果。

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

接种环

接种针

冻存管

冻存盒

程序降温盒

离心管

微量离心管

血清移液管

巴氏吸管

移液吸头

8连管

96孔板

封板膜

封板刮刀

 

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

细胞培养板平底TC处理无菌

耐思细胞培养皿35mm

耐思细胞培养皿60mm

耐思细胞培养皿100mm

耐思细胞培养皿1150mm

硕华细胞培养皿35mm

硕华细胞培养皿60mm

硕华细胞培养皿100mm

一次性培养皿

一次性细胞培养皿

无菌TC细胞培养皿

耐思玻底培养皿

硕华玻底培养皿

激光共聚焦培养皿

耐思玻底培养皿15mm

耐思玻底培养皿20mm

独立灭菌玻底培养皿

灭菌TC玻底培养皿

硕华玻底培养皿15mm

硕华玻底培养皿20mm