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质粒转化与质粒提取
发布时间:2019-04-18 16:01:34| 浏览次数:
TAG: 质粒转化 质粒提取

    关键词:质粒转化;质粒提取

     

    质粒转化

    -80℃冰箱取感受态细胞DH5α,冰上融化。轻弹重悬后加DNA样本(<10ng)。冰浴30min,42℃金属浴45sec,再置冰中3min。加入0.7ml无抗性LB培养基,37℃、200rpm震荡培养1h。取适量菌液涂布于含Amp的固态LB板上。37℃孵育,过夜培养。

    1.2.4 质粒提取

    采用Omega Plasmid Mini Kit I试剂盒提取质粒DNA。提取前的菌液在37℃摇床中培养至少12h。取10ml菌液,3000rpm,室温离心10min,弃上清液。加入250μl solution I/RNase A,充分重悬后移至1.5ml EP管中。加250μl solution II,颠倒EP管,4 min,直至细胞充分裂解。加350μl solution III,颠倒EP管至白色沉淀生成。13000g,离心10min。将上清液移至HiBind?DNA Miniprepcolumn中,10000g,离心1min,弃滤液。加500μl HB Buffer,10000g,离心1min,弃滤液。加700μl DNA Wash Buffer,10000g,离心1min,弃滤液,此步骤重复一次。13000g,空柱离心3min。将柱子装配到干净的1.5ml EP管中,加入30~50


 
 
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