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H1299、A549细胞培养方法步骤
发布时间:2019-04-18 16:01:01| 浏览次数:
TAG: H1299 A549 细胞培养 细胞复苏 细胞冻存

    关键词:H1299;A549;细胞培养;细胞复苏;细胞冻存

    细胞培养,H1299、A549分别采用RPMI 1640和DMEM培养基培养,培养基中另含10%胎牛血清、青霉素100U/ml、链霉素100μg/ml。细胞培养于CO2培养箱,培养条件:37℃恒温,5%CO2。一般2~3d,细胞状态良好且融合度在90%左右时进行传代,传代过程中采用0.25%的胰蛋白酶对细胞进行消化,H1299一般情况下1传2,A549通常1传3。

    1.2.1.1细胞复苏

    液氮中取出冻存细胞后迅速放入37℃水浴锅中,解冻以后转移细胞至1.5 ml EP管中,1000 rpm,离心5 min。弃上清液,加入完全培养基重悬细胞,并根据实验具体要求接种于培养皿中。过夜后需更换培养基。

    1.2.1.2细胞换液和传代

    确定细胞状态良好且没有被污染的前提下,吸掉旧的培养基,用PBS冲洗2至3次,吸掉PBS,加入完全培养基。若细胞需要传代,在PBS冲洗细胞3次后,加入预热的胰酶消化细胞,镜下观察细胞变圆后迅速加入完全培养基终止胰酶消化作用,将细胞移至EP管中,1000 rpm,5 min。弃掉上清液,加入完全培养基重悬细胞,根据实验需要接种细胞于培养皿中。

    1.2.1.3细胞冻存

    配制含20%FBS、10%DMSO的冻存液。对数生长期的细胞用PBS洗2次,再用胰蛋白酶消化细胞,加入培养基终止消化并将细胞移至EP管中,1000rpm,离心10min。弃掉上清液后加入适量的冻存液重悬细胞并移至冻存管中。依次置于4℃、30min,-20℃、30min,-80℃过夜,液氮中长期保存(也可以放在冻存盒中直接-80℃冻存)。

     


 
 
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