【摘要】目的验证睾酮对成年C57BL/6近交系雌鼠的胰岛素敏感性的影响及其对脂肪组织胰岛素通路信号、炎症信号通路分子活性的影响。方法将8周龄C57BL/6雌性小鼠21只随机分为睾酮组(n=11,每天按1.0ms/100g体质量腹腔注射睾酮)及对照组(n=10,每天注射等体积sesameoil),共给药16周分别检测两组小鼠体质量和体脂含量的变化;分别于处理前(0周),处理后2、3和16周,行腹腔内注射葡萄糖耐量试验;于睾酮处理16周行腹腔胰岛素耐受试验(IrI-I');两组小鼠均在治疗17周后被处死,ELISA检测两组血清白细胞介素(IL)-6、单核细胞趋化因子(MCP)-1的表达;免疫印迹检测两组脂肪组织胰岛素信号通路分子GSK-313,InsR及NF-KBp65磷酸化的改变,巨噬细胞不同表型表面分子CDl6/32、CD206的表达。结果(1)睾酮组与对照组成年雌鼠的体质量以及体脂含量差异无统计学意义(P>0.05);(2)处理2周睾酮组小鼠空腹血糖开始明显高于对照组(P<0.05);处理3周睾酮组IGqq"曲线下面积开始明显大于对照组(P<0.05),至16周后差异更显著(P<0.01);处理16周后睾酮组IrI_I’曲线下面积极显著大于对照组(P<0.01);处理16周后睾酮组雌鼠血清及脂肪组织中的IL-6、MCP-1均较对照组明显(P<0.05);睾酮组脂肪组织的InsR、GSK一3B的磷酸化水平及CD206的表达均明显低于对照组(P<0.05),而脂肪组织NF-KBp65磷酸化水平、CDl6/32的表达明显高于对照组(P

【关键词】睾酮;胰岛素抵抗;C57BL/6雌鼠;持续低度炎症;M1型巨噬细胞

讨论

近年来发现,PCOS患者存在InsR活性下降、IRS-1表达及活性下降、P13K活性下降、GLUT4表达下降等多处信号分子异常,导致IR;并且IR不仅存在于肥胖患者也存在于非肥胖患者,因此IR是PCOS的一种基本特性,肥胖只是加重了胰岛素抵抗。另外,PCOS患者也普遍存在持续低度炎症,表现为:外周血白细胞计数及中性粒细胞计数增加,循环中炎症因子如C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6、18及MCP-1等的水平升高,且与体内雄激素水平呈正相关。本研究通过采用在体实验来验证高雄激素对成年期雌性动物胰岛素敏感性及持续低度炎症状态的影响。

本实验采用11只8周龄C57BL/6雌鼠,每天从腹腔注射睾酮(1mg/100g体质量)溶液,另用10只8周龄C57BL/6雌鼠每天从腹腔注射相应量溶剂(sesameoil)作为正常对照组,想进一步了解睾酮对雌鼠脂肪组织的影响。通过检测对照组、睾酮组雌鼠的体质量,发现从给药前至给药16周后两组雌鼠的体质量及体脂含量差异均无统计学意义,提示,睾酮不影响成年C57BL/6雌鼠的体质量增长。两组雌鼠的体脂含量差异无统计学意义,提示睾酮尚未通过诱导成年雌鼠肥胖来引起IR。

本实验还探讨了睾酮对成年C57BL/6雌鼠胰岛素敏感性的影响。从结果中可见:(1)空腹血糖:给药2周时睾酮组即出现空腹血糖明显增高,且持续至给药16周后。(2)IGTr:提示在给药2周睾酮组首先出现空腹血糖的明显增高,给药3周时睾酮组又出现15min血糖增高,而且IGTI"曲线下面积(AUC)也明显增大(P<0.05),表明给药3周时睾酮组出现IR;至给药16周时,睾酮组所有时间点血糖均高于对照组(P<0.05),IGTI"的AUC差异更加显著(P<0.01),表明给药16周时睾酮组小鼠的IR程度加重。(3)IrI-I'的结果提示给药后16周时睾酮组所有时间点血糖均高于对照组,睾酮组的AUC也极显著大于对照组,这直接表明此时睾酮组雌鼠的胰岛素耐量明显受损。